細胞培養(cell culture)是指在體外模擬體內環(huán)境(無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養條件等),使之生存、生長(cháng)、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規名詞為細胞培養技術(shù)。不論對于整個(gè)生物工程技術(shù),還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō),細胞培養都是的過(guò)程,細胞培養本身就是細胞的大規??寺?。細胞培養技術(shù)可以由一個(gè)細胞經(jīng)過(guò)大量培養成為簡(jiǎn)單的單細胞或極少分化的多細胞,這是克隆技術(shù)的環(huán)節,而且細胞培養本身就是細胞的克隆。細胞培養技術(shù)是細胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù),通過(guò)細胞培養既可以獲得大量細胞,又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長(cháng)增殖等。
細胞培養實(shí)驗室組建的基本要求:
1、細胞培養是一種無(wú)菌操作技術(shù),要求工作環(huán)境和條件必須保證無(wú)微生物污染和不受其它有害因素的影響。
2、細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響,要求工作環(huán)境清潔、空氣清新,干燥和無(wú)煙塵。
3、細胞培養室的設計原則一般是無(wú)菌操作區設在室內較少走動(dòng)的內側,常規操作和封閉培養于一室,為10萬(wàn)級潔凈環(huán)境的潔凈室。而洗刷消毒工作設在潔凈室外,避免物品污染潔凈室內環(huán)境。細胞潔凈室需要一個(gè)空調系統并對外界保持一定的正壓。
4、解剖實(shí)驗室主要用于對器官組織的分離,需要有無(wú)菌操作臺、解剖顯微鏡、各種手術(shù)器材等。
組織細胞培養室除一般實(shí)驗室的普通常規設備外,尚有一些特殊需要的設備?;究煞譃閮纱箢?lèi):
I. 細胞培養實(shí)驗室常用的基本儀器設備
1.顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細胞培養室所必需的日常工作常規使用設備之一,便于掌握細胞的生長(cháng)情況并觀(guān)察有無(wú)污染等。
2.培養箱:體外培養的細胞和體內細胞一樣,需要在恒定的溫度下生存,大多數情況下,最適溫度是37℃,溫差變化一般不應超過(guò)±0.5℃,細胞在溫度升高2℃ 時(shí),持續數小時(shí)即不能耐受,40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養箱,如具有較高靈敏度的恒溫培養箱及CO2培養箱。
3.干燥箱:用于細胞培養箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒。
4.水純化裝置:細胞培養對水的質(zhì)量要求較高,細胞培養以及與細胞培養工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴格純化處理。進(jìn)行細胞培養時(shí)配制各種培養液及試劑等均需使用三次蒸餾水:即使是用于玻璃器皿的沖洗,也應使用二次以上蒸餾水。
5.冰箱:細胞培養室必須配備。
a、普通冰箱或冷藏柜——儲存培養液、生理鹽水等培養用的物品及短期保存組織標本。
b、低溫冰箱(-20℃)——用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長(cháng)時(shí)期存放的制劑,如酶、血清等。
6.細胞冷凍儲存器:儲存器常用的是液氮容器。根據使用需要分為不同的類(lèi)型及多種規格。選擇購置液氮容器時(shí)要綜合考慮容積大小,取放使用方便及液氮揮發(fā)量(經(jīng)濟)三種因素。
7.離心機:進(jìn)行細胞培養時(shí),常規需要進(jìn)行制備細胞懸液、調整細胞密度、洗滌、收集細胞等工作,通常需要使用實(shí)驗室離心機。一般可常規配置4000rpm的臺式離心機,例如細胞沉降,使用低速離心機即可,離心力過(guò)大有時(shí)可能引起細胞的損傷。
8.天平:常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
9.消毒器:一般為高壓蒸汽滅菌鍋,直接或間接與細胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。
10.濾器:目前細胞培養工作中采用的培養用液,包括人工合成培養液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長(cháng)因子等物質(zhì),這些物質(zhì)在高溫或射線(xiàn)照射下易發(fā)生變性或失去功能,因而上述液體多采用濾過(guò)消毒以除去細菌。目前常使用的濾器有玻璃濾器和微孔濾器,各種濾器有其使用原理和特點(diǎn)。
常用的培養器皿:
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